本文RBC-O较37℃温浴、41℃温浴、血浆置换、标本试剂双重温浴四种解决方法减少了许多操作，所获得的研究参数可直接用，值得临床借鉴和推广。

  冷凝集是全血细胞计数（简称为血常规）常见的一种现象，特别常见于冬春季，严重者表现为EDTA抗凝血常规试管的管壁上红细胞凝集呈细沙状，常采用37℃温浴30min后再次上机检测获得结果。随着科学技术持续不断的发展，许多新型技术应用于全血细胞计数检测中，本文就血常规标本冷凝集几种常用处理办法来进行比较分析。

  患儿，男，5岁，2022年3月30日就诊，发热5天，咳嗽3天。患儿5天前疑似受凉后出现发热，最高体温40℃，自行口服头孢克洛颗粒、布洛芬等，体温反复，无明显好转，3天前咳嗽明显，阵咳无痰。胸部摄片示：两下肺渗出性病变考虑，拟“双下支气管肺炎”收住院。

  入院查体：体温37.9℃，心律112次/分，呼吸28次/分，神志清楚，精神尚可，呼吸平稳，面色红润，扁桃体稍肿大，双肺呼吸音粗糙，可闻及湿啰音，腹软，无压痛及反跳痛，肝脾肋下未触及，神经系统检查阴性。

  呼吸道病原谱：呼吸道合胞病毒（+）、流感病毒B型（±）、副流感病毒（±），肺炎支原体IgG(-)、肺炎支原体IgM（+）。

  3月30日胸片检查示：双下肺野见大片状模糊影，左侧肋膈角模糊。4月2日肺部CT提示：右肺中叶、左上肺及两肺下叶多发感染灶，右肺中叶局部不张，左侧胸腔积液，局部组织压迫不张。临床诊断为重症肺炎、胸腔积液（左侧）、肺炎支原体感染。

  遵照国际血液学复检专家组推荐的41条复检规则《关于自动化全血细胞计数和WBC分群分析后行为的建议规则》[1]第13条：MCHC≥参考范围上限20g/L，需检查标本血浆状况、红细胞聚集及球形红细胞。

  因本案例MCHC异常增高，达到1063g/L（原始检查数据见图1），故对原标本外观检查未见异常、并进行涂片及离心后血浆外观检查，无脂血及溶血（涂片镜检见图2）。联合呼吸道病原谱及胸片，肺部CT检查，本案例临床诊断为肺炎支原体引起重症肺炎，冷凝集素过高引起标本冷凝集造成红细胞聚集成团。

  Land于1913年首次对冷凝集素进行报道[2]，冷凝集素是一种自身抗体，主要是免疫球蛋白M（IgM）完全抗体，少数为IgG或IgＡ，但其效价多＜1:16，通常不会导致自身血细胞的凝集。

  在某些病理情况下，冷凝集素的效价可异常增高而引起非常严重的临床症状，称为冷凝集素综合征。当血液温度不高于某一特定温度（通常低于25℃，在4℃反应最明显）时，循环中冷凝集素就会与血细胞抗原结合，促使RBC发生可逆性凝集，阻塞微循环而使患者出现发绀，严重者发生自身免疫性溶血，当升温至37℃时，凝集消失。

  主要继发于支原体肺炎、传染性单核细胞增多症、慢性肝炎、系统性红斑狼疮、慢性淋巴细胞白血病及骨髓瘤等。甚至某些患者在冷环境下可表现鼻尖、口唇、耳廓、手指及足趾发绀，加温后消失，可出现雷诺现象。

  Finland等提出了在37℃温浴作为一种消除细胞计数中冷凝集素干扰的方法。近些年来也提出了许多其他方法，如血浆置换、预稀释以及标本与试剂双重温浴等方法，37℃温浴法仍是最广泛的方法之一[3]。

  但是在临床实际工作中遇到冷凝集素效价较高的标本时，37℃温浴法并不能完全消除干扰。解鸿翔等[3]，孙秋瑾等[4]研究均发现：37℃温浴不同时间后，RBC、HCT、MCH、MCHC均得到明显改善，但镜检仍有红细胞聚集成团现象，41℃温浴30min后，RBC明显升高，HCT、MCH和MCHC亦趋于正常，镜检可见RBC分布均匀。

  在遇到冷凝集素效价较高的标本时，预稀释法也不能完全消除标本干扰，稀释还会增加检验数据随机误差；标本与试剂双重温浴法既温浴标本，还要温浴试剂，又要排去仪器内原有试剂，检测空白标本，操作繁琐，耽误时间。

  血浆置换法虽然能对红细胞参数很好地修正作用，但会引起白细胞与血小板损失，且多次置换丢失现象更严重。对于含有高效价冷凝集素的血常规标本，如何获得更真实的检测结果仍是值得探究的问题。

  电阻抗法血细胞计数原理：血细胞相对于等渗电解质溶液为不良导体，其电阻大于等体积的电解质溶液，当血细胞通过血细胞分析仪计数小孔时，可造成电流回路的电阻值瞬间增大，产生脉冲峰，脉冲数量和大小反映细胞数量和体积。

  理论上是希望细胞一个个地通过宝石微孔，红、白细胞的直径一般是7~15μm，单核细胞也只有20μm左右，而宝石微孔的孔径却为100μm，实际上可能会存在两个、三个甚至更多细胞、一同或前后尾随进入小孔，但只能产生一个信号脉冲，使计数有所丢失。由于冷凝集标本在电阻抗方法血液分析仪上检测时，大量聚集的RBC通过计数小孔常被认为是大红细胞，或不计入有效体积红细胞，进而引起RBC总数严重减少。

  SYSMEX XN9000血液分析仪网织红通道有40℃液体加热器硬件的特性，因此其测出的研究参数RBC-O能够在一定程度上帮助排除大部分冷凝集干扰，也可将RET通道的另一个研究参数HGB-O（网织通道血红蛋白）作为判断条件，RET通道的HGB-O与正常HGB无明显差别（CV3.5%），RBC-O结果可直接采用[2]。本案例运用RET通道研究性参数RBC-O获得血常规红细胞计数结果较为满意。

  现有血液分析仪大多数都是以电阻抗法进行血细胞计数为基础，综合运用了流式细胞术、鞘流、激光、化学染色等等技术，对RBC、PLT、WBC及分类等计数和分析，除了常规获得上述参数外，还有许多研究参数，比如本文RBC-O，还有光学法血小板（PLT-O）、未成熟粒细胞（IG）、有核红细胞（NRBC）、网织红细胞血红蛋白量（RET-He）等等在临床相关疾病诊治中具备极其重大意义。本文RBC-O较37℃温浴、41℃温浴、血浆置换、标本试剂双重温浴四种解决方法减少了许多操作，所获得的研究参数可直接用，值得临床借鉴和推广。

  [1]尚红，王毓三，申子瑜.全国临床检验操作规程[M].第四版.北京：人民卫生出版社，2015,17.

  [2]王鑫，李建英，陈倩，等.两种全血细胞分析仪研究参数在冷凝集标本处理中的应用价值[J].中国医学装备，2020,17（11）：42-45.

  [3]解鸿翔，沈燕，庞珍珍，等.41℃温浴对高效价冷凝集素样本血常规检测结果的影响[J].中国医学科学院学报，2021,43（4）：507-512.

  [4]孙秋瑾，王宇，钟璐.冷凝集素干扰血细胞分析结果水浴前后结果均失真研究[J].检验医学与临床，2019,16（5）：613-617.